负压救护车首先得将医疗舱和驾驶舱隔离，保证驾驶者的生命。负压救护车除了具备普通救护车的专业救护设备以外，还可以保证医疗舱的卫生，具有隔离性、防腐性、通风性和耐菌性。通过车内的负压装置，使车内的气压低于外界大气压（通常为-20Pa甚至更低），让空气自由流动时只能由车外流向车内，并将车内空气进行无害化处理后排出。从医疗舱中抽出的气体会经过过滤装置排到车外，而过滤装置可以阻挡并杀灭99.97%的直径在0.3微米以上的病菌。使负压舱内形成一个固定的空气流通区域。空气由清洁区（医务人员区）、流向感染源区（病人区），并将舱内空气压力维持在-10Pa～-120Pa之间，使空气流的死角和漩涡流小。
那么和患者在同一个医疗舱内的医护人员就不怕被感染吗？这时就要说到负压救护车的空气循环系统，它保证了清洁空气自上而下流动，使得新鲜空气首先经过医护人员再到平躺的患者，后经过患者头部附近的过滤装置流出车外。装备更齐全的负压救护车还会配备专用的隔离舱，患者平躺在隔离舱内，通过隔离舱的风机进行呼吸。 针对传染性极强的患者，车内还需要另外配备负压隔离担架，将病人完全置于单独的负压隔离舱内，病人在隔离舱内呼出的气体过滤后才排出到医疗舱，医疗舱的空气在经过负压装置过滤后再排到车外。限度地减少病人和医护人员同处一室发生交叉感染的风险，同时也减少病人在进出救护车前后的空窗期，感染其他人员的风险。